Oct.2024 23
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外周血单个核细胞分离方法

细节
外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)是外周血中具有单个核的细胞,包括淋巴细胞和单核细胞。血液样本中单个核细胞包括淋巴细胞和单核细胞等细胞,其细胞密度为1.075~1.090g/ml,与其他细胞不同,红细胞和粒细胞等细胞密度较大,为1.090g/ml 左右,血小板为1.030~1.035g/ml。因此,外周血单个核细胞主要的分离方法是密度梯度离心法,使一定密度的细胞按相应密度梯度分布,从而将各种血细胞加以分离。
外周血单个核细胞分离具体方法如下(以血液样本量12mL为例):
1)取新鲜抗凝血12 mL,与生理盐水或其他等渗溶液1:1混匀。
2)取一支50 mL离心管,加入12 mL外周血单个核细胞分离液,将稀释后血液小心缓慢加于分离液之液面上。
3)使用高速冷冻离心机(Thermo,型号Sorvall ST 40R800g离心20 min,升速2,降速2,离心温度20±2℃
4)小心吸取单个核细胞层到新的50 mL离心管,加入30 mL生理盐水或其他等渗溶液混匀,室温250g离心10 min,小心弃掉上清,去除残余血小板。
5)重复步骤(4),将会去除绝大部分血小板。
6)将细胞用缓冲液或培养基重悬后进行检测、培养等后续操作。
注意:血液需为新鲜的抗凝血,血液收集时应无菌操作且在储存、处理和运输过程中避免冷冻和冷藏。
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