外周血淋巴分离液通过密度分离作用,用于样本中不同成分的分离,以便于对样本的进一步分析。本文是一篇外周血淋巴细胞分离液使用说明的文章,主要介绍了淋巴细胞分离液的原理,使用方法和注意事项,快来一起学习吧!
一、外周血淋巴细胞分离液使用说明之原理
血液样本中单个核细胞包括淋巴细胞和单核细胞等细胞,其细胞密度为1.075~1.090g/ml,与其他细胞不同,红细胞和粒细胞等细胞密度较大,为1.090g/ml 左右,血小板为 1.030~1.035g/ml。因此,可利用外周血单个核细胞分离液进行密度梯度离心,使一定密度的细胞按相应密度梯度分布,从而将各种血细胞加以分离。
二、外周血淋巴细胞分离液使用说明书之使用方法
以10ml血液样本量为例,使用方法如下:
(1)取新鲜抗凝血 10mL,与生理盐水或其他等渗溶液 1:1 混匀。
(2)取一支50mL离心管,加入20mL外周血单个核细胞分离液,将稀释后血液小心缓慢加于分离液之液面上。
(3)使用高速冷冻离心机(Thermo,Sorvall ST 40R)800g离心20 min,升速2,降速2,离心温度20±2℃。(4)小心吸取单个核细胞层到新的50 mL离心管,加入30mL生理盐水或其他等渗溶液混匀,室温250g离心10分钟,小心弃掉上清,去除残余血小板。
(5)重复步骤(4),将会去除绝大部分血小板。
(6)将细胞用缓冲液或培养基重悬后进行检测、培养等后续操作。
三、外周血淋巴细胞分离液使用说明之注意事项
1.实验要求,在正常大气压下,样本、分离液及分离环境温度为20±2℃。否则会影响质量。
2.需在采血后2小时内进行,否则将影响分离效果。
3.细胞分离液从冰箱取出后,不可立即使用,需待溶液温度升至室温时,摇匀后使用。
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