血管组织解离的主要目的是分离血管中的细胞成分,以便进行更深入的研究和分析。血管组织解离常见方法包括机械法、酶消化法和化学法。机械法主要是通过物理手段分离组织,化学法主要是使用化学试剂破坏细胞间连接,酶消化法则是利用酶分解细胞外基质。
血管组织解离试剂盒主要是采用酶消化法对血管组织进行解离消化,解决血管组织解离难度大的问题,完成单细胞悬液的制备。血管组织解离试剂盒使用方法如下:
准备工作:水浴锅设置到37℃、配制含5% FBS的PBS。
1.取一个5 mL离心管,加入210 μL血管组织解离液1和2790 μL的RPMI 1640培养基,混匀。
2.将血管组织用PBS清洗干净,剪碎,并转移到第1步准备好的溶液中,摇晃混匀。
3.放在37℃水浴锅中20 min。过程中,每隔3 ~ 5 min摇晃混匀。
4.消化20 min结束后,4℃,300 ×g离心5 min,弃上清。
5.向沉淀中加入3 mL RPMI 1640培养基,吹打混匀,4℃,300 ×g离心5 min,弃上清。
6.向沉淀中加入2470 μL RPMI 1640培养基和530 μL血管组织解离液2,吹打混匀,置于37℃水浴锅中30 min ~ 3 h。
7.不同类型、状态的血管消化时间不同,每隔10 ~ 15 min质检一次细胞悬液,根据细胞总量及活性等确定消化停止时间。
8.消化完成后,用70 μm细胞筛进行过滤,收集滤液于新的15 mL离心管中。
9.加3 mL RPMI 1640培养基于消化的离心管中,上下颠倒涮洗管壁,涮洗液同样经过同一个70 μm细胞筛进行过滤,收集滤液于第8步的15 mL离心管中。
10.重复步骤9两次,共洗3次,共收集滤液12 mL。
11.将收集液于4℃,300 ×g离心5 min,弃上清。
12.用5 mL含5% FBS的PBS重悬沉淀,吹打混匀,4℃,300 ×g离心5 min,弃上清。
13.重复步骤12一次,共清洗两次。
14.用50 μL ~ 2 mL含5% FBS的PBS重悬沉淀,重悬液的体积根据所需的细胞浓度进行调整。
15.用细胞计数仪对细胞悬液进行质控并记录。
16.质控结束后请立即进行后续实验。