细胞污染是细胞培养实验中最常见的技术挑战，直接影响实验数据的可靠性。本文系统梳理细胞污染的预防策略与解决方案，帮助科研人员建立规范化的防控体系。
一、细胞污染的主要类型
1.生物污染：细菌、真菌、支原体等微生物污染占比超过80%；
2.化学污染：培养基成分异常或试剂污染；
3.交叉污染：不同细胞系间的意外混杂；
二、四级预防控制体系
1.无菌操作规范
·生物安全柜提前30分钟紫外灭菌；
·操作全程佩戴无菌手套并定期喷洒75%乙醇；
·枪头、培养皿等耗材开封前酒精灯灼烧瓶口；
2.环境控制标准
·CO₂培养箱每月甲醛熏蒸消毒；
·水浴锅添加0.2%硫酸铜抑制微生物；
·定期更换HEPA过滤膜（建议周期≤6个月）；
3.试剂质量管理
·胎牛血清56℃灭活30分钟；
·培养基配制后0.22μm滤膜过滤；
·冻存液现配现用避免反复冻融；
4.动态监测机制
·每日观察培养基颜色与浑浊度；
·每周进行革兰氏染色检测；
·每季度进行PCR支原体筛查；
三、污染应急处理方案
1.细菌/真菌污染
立即终止培养，污染物121℃高压灭菌30分钟，培养箱用2%过氧乙酸全面消毒。
2.支原体污染
选用BM-Cyclin抗生素处理（0.5μg/ml连续治疗14天），处理后需经Hoechst染色验证。
3.交叉污染
启动STR基因分型鉴定，建立细胞系特异性遗传档案。
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